SHuffle T7 E. coli感受态细胞

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1.产品简介：

SHuffle T7 E. coli 菌株是 K12 的衍生菌株。该菌株的染色体中整合了一个拷贝的二硫键异构酶 DsbC 基因 ，可以促进含有二硫键蛋白的正确折叠；此外 DsbC 还是一个分子伴侣，可以帮助不含二硫键蛋白正确折叠，形成正确构象，同时该菌株可降低目的基因的本底表达，适合于毒性基因的原核表达。SHuffle T7 E. coli 菌株染色体中整合了一个拷贝的T7 RNA 聚合酶基因，可以表达噬菌体 T7 RNA 聚合酶，适合于 T7 启动子诱导的蛋白表达；该菌株还可以表达大肠杆菌 RNA 聚合酶，所以可用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达。SHuffle T7 E. coli 菌 株具有抗 T1 噬菌体感染的特点，具有链霉素，壮观霉素抗性。SHuffle T7 E. coli 感受态细胞由特殊工艺制作， pUC19 质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

基因型：F´ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD13fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)Pvull phoR ahpC* galE(or U) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq) ΔtrxBrpsL150(Str R)Δgor Δ(malF)3

2.使用说明：

1)．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2)．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。
3)．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4)．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5)．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1)．刚化冻的细胞转化效率最高，避免反复化冻。

2)．质粒质量和浓度等的差异会使转化效率有所下降。

*本试剂仅供实验室研究使用