一管式点突变试剂盒

产品及特点

基因的定点突变是重要的分子生物学技术，广泛用于载体构建、基因改造、蛋白质功能研究等领域。但传统的方法需要使用单链DNA模板，而得到单链DNA模板又需要先将基因克隆到类似M13这种载体中，操作过程冗长。为了克服这些缺点，本公司将突变位点设计到一对互补的引物中，用高保真DNA聚合酶扩增质粒模板，然后用Dpn I去除原始的甲基化模板，新合成的DNA通过互补形成带切口的双链质粒，直接用于转化感受态细菌。本方法过程示意图如下：

本产品具有下列特点：

1. 直接使用质粒DNA作为模板，免去了制备单链DNA的步骤。

2. 基于高保真PCR，对模板DNA序列没特殊要求，可以用于突变任何序列。同时对模板的需求量很少。

3. 一管式，全部在一个优化的缓冲体系中完成，非常简单。

4. 使用Dpn I去除未突变模板，突变效率高达90%。

5. 不需要连接步骤，反应结束后可以直接转化。

6. 提供阳性对照质粒pUC19和突变引物，便于分析失败原因。

7. 可用于制备点突变，缺失突变和插入突变。

8. 使用于从dam+细菌中纯化的质粒（常用的宿主菌都是dam+），由于JM110

和SCS110为dam-，所以从中提取的质粒不能用本产品制备突变。

使用及效果

将5-50 ng甲基化的模板质粒DNA用重叠引物扩增16-18次，然后加入1 μLDpn I，37℃保温一小时去除残留的甲基化的模板DNA，然后直接转化感受态细胞。